本文主要介紹高效液相色譜儀常見(jiàn)的有關(guān)峰的問(wèn)題，可能的原因及解決辦法。
1、出現(xiàn)肩峰或分叉
①樣品體積過(guò)大－－用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% ；
②樣品溶劑過(guò)強(qiáng)－－采用較弱的樣品溶劑；
③柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；
④柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼,加在線(xiàn)過(guò)濾器,過(guò)濾樣品；
⑤進(jìn)樣器損壞－－更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子。
2、出現(xiàn)鬼峰
①進(jìn)樣閥殘余峰－－每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗；
②樣品中未知物－－處理樣品；
③柱未平衡－－重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑（尤其是離子對(duì)色譜）；
④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化劑 ；
⑤水污染（反相）－－通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水 。
3、出現(xiàn)峰拖尾
①柱超載－－降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相；
②峰干擾－－清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相；
③硅羥基作用－－加三乙胺,用堿致鈍化柱,增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,純化樣品 ；
④柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼,加在線(xiàn)過(guò)濾器,過(guò)濾樣品 ；
⑤柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；
⑥死體積或柱外體積過(guò)大－－連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 ；
⑦柱效下降－－用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱。
4、使峰位發(fā)生重排
在分析多組分樣品時(shí)，僅改變流動(dòng)相的強(qiáng)度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時(shí)間，不會(huì)發(fā)生峰位的重排。
下列條件改變可能發(fā)生峰位重排：流動(dòng)相中換了強(qiáng)溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動(dòng)相的組成改變（如加入離子對(duì)試劑三乙基胺等）。
5、出現(xiàn)峰展寬
①樣品體積過(guò)大－－用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% ；
②在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展－－進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 ；
③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢－－設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn) ；
④檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大－－設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10% ；
⑤流動(dòng)相粘度過(guò)高－－增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相；
⑥檢測(cè)池體積過(guò)大－－用小體積池,卸下熱交換器；
⑦保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)－－等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫；
⑧柱外體積過(guò)大－－將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最�。�
⑨樣品過(guò)載－－進(jìn)小濃度小體積樣品 。
6、出現(xiàn)倒峰
所用的流動(dòng)相在檢測(cè)波長(zhǎng)下有吸收，而進(jìn)在此波長(zhǎng)下沒(méi)有吸收或吸收低于流動(dòng)相的溶液，在流動(dòng)相中會(huì)出現(xiàn)洞穴，通過(guò)柱后出現(xiàn)倒峰。
7、出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰
用比流動(dòng)相強(qiáng)度大的大體積樣品進(jìn)樣，通常會(huì)損害色譜圖的質(zhì)量，而出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰。
應(yīng)遵循下列規(guī)則選用溶劑溶解樣品：A最好用流動(dòng)相溶解樣品進(jìn)樣。B用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進(jìn)樣，主要缺點(diǎn)是每次進(jìn)樣后在色譜圖的開(kāi)頭出現(xiàn)大的負(fù)峰，有時(shí)還波及到樣品峰。C需要時(shí)用強(qiáng)溶劑溶解進(jìn)樣。
8、前延峰的發(fā)生及處理
因柱溫問(wèn)題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見(jiàn)前延峰，提高溫度后前延峰的現(xiàn)象消失。在離子對(duì)色譜中，前延峰的另一個(gè)原因是用非流動(dòng)相作樣品溶劑。因此在離子對(duì)色譜中要求僅用流動(dòng)相溶解樣品，而且進(jìn)樣量不要太大，否則會(huì)導(dǎo)致前延峰或其它問(wèn)題。在RP-HPLC中樣品溶液的強(qiáng)度大于流動(dòng)相引起前延峰。增加流動(dòng)相的強(qiáng)度，減少樣品溶液的強(qiáng)度，在離子對(duì)色譜中增加離子強(qiáng)度，可以克服前延峰的效應(yīng)。此外使用流動(dòng)相溶解樣品是解決的最簡(jiǎn)單實(shí)用的方法。
9、峰變寬的原因
A、在使用過(guò)程中柱本身退化，逐漸降低柱效。
B、柱外峰寬效應(yīng)。一根很好的專(zhuān)用柱用于另一液相色譜系統(tǒng)引起塔板數(shù)降低，說(shuō)明新系統(tǒng)有很大的柱外峰寬效應(yīng)
C、化學(xué)效應(yīng)，多數(shù)是流動(dòng)相和固定相相互作用所致，改變流動(dòng)相可使寬峰有所改善。
