一、維生素A
目前維生素A都是合成的，來(lái)源：（1）從動(dòng)物肝臟中得到；（2）從維生素前體而得到（維生素前體：主要指類胡蘿卜素，主要是β-胡蘿卜素）。
二、測(cè)定方法簡(jiǎn)述
維生素A的測(cè)定常用的方法有三氯化銻比色法、紫外分光光度法、熒光光度計(jì)分析法、液相色譜法。
對(duì)于三氯化銻比色法適用于樣品中含VA高的樣品，方法簡(jiǎn)便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，但是對(duì)維生素A含量低的樣品，如每克樣品中含5～10μg維生素A時(shí)，這時(shí)樣品由于受其脂溶性物質(zhì)的干擾，不應(yīng)用比色法測(cè)定。
對(duì)于紫外分光光度法不必加顯色劑顯色，可直接測(cè)定維生素A的含量，對(duì)樣品中含VA低的也可以測(cè)出可信結(jié)果，操作簡(jiǎn)便、快速。
三、測(cè)定步驟
⑴ 樣品用有機(jī)溶劑萃取脂類
樣品可以根據(jù)脂肪的測(cè)定處理脂肪，即索氏抽提法，采用乙醚作提取劑，也可用熱苯回流方法提取脂類。如果樣品中含蛋白質(zhì)和淀粉多的情況下可采用乙醚提取法。
⑵脂類的皂化
脂類有維生素和脂肪這兩部分通過(guò)皂化（50%KOH、無(wú)水C2H3OH、熱回流）把它們分開(kāi)，得到一部分皂化物和一部分不皂化物。
皂化條件：
C2H3OH︰脂類 = 8︰1；
KOH量 = 脂量×皂化價(jià)（mg）×2.5；
皂化溫度與時(shí)間：70℃、30分鐘
在皂化時(shí)可以加入抗氧劑連苯二酚和對(duì)苯二酚，防止氧化。
⑶ 提�。翰辉砘锖驮砘锝�(jīng)水、苯、乙醚萃取可得到不皂化物。
⑷ 柱層析分離干擾物質(zhì)
采用柱層析分離干擾物質(zhì)，如果柱層析把β-胡蘿卜素也洗脫下來(lái)，那么這時(shí)維生素A與β-胡蘿卜素就是一個(gè)混合物，還要將它們分離開(kāi)。如果樣品中只有維生素A而不含β-胡蘿卜素時(shí)，這時(shí)可直接定容。
維生素A與β-胡蘿卜素分離：
吸附劑： 8分中性Al2O3和2分堿性Al2O3混合，裝柱
分離方法：a. 用2%丙酮石油醚洗β-胡蘿卜素；b.用乙醚洗VA。
四、測(cè)定方法
⑴ SbCl3比色法
維生素A／CHCl3 ＋ SbCl3／CHCl3→形成蘭色物質(zhì)→在620nm有最大吸光峰
這種蘭色物質(zhì)不穩(wěn)定，很快褪色或變成其它物質(zhì)，所以在分析時(shí)最好在暗室中進(jìn)行，并且做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
計(jì)算：每百克樣品含VA的量= C×（V1/V2）×（100/W）
C：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得VA的量
V1：CHCl3定容的量
V2：測(cè)定所取樣液體積
⑵ 紫外分光光度法
a.原理
VA為脂溶性的，測(cè)定VA時(shí)必須先將樣品中的脂肪抽提出來(lái)進(jìn)行皂化，萃取不皂化部分，在經(jīng)柱層析除去雜質(zhì)等干擾物質(zhì)，在紫外328nm下測(cè)定，求出含量。
b.方法
1）提取及皂化
稱樣10.00g → 于燒杯中 →加40ml水?dāng)噭?nbsp;→ 移250ml分液漏斗中 → 加氨水5ml → 加乙醇35ml →搖勻 → 用乙醚抽提（每次40ml抽提三次） → 收集乙醚層 → 用10ml水洗乙醚層三次 →水層再用30ml乙醚抽提一次 → 合并所用乙醚 → 用索氏法除乙醚→ 待瓶中乙醚除盡后 → 加30ml80%的KOH → 40mlC2H5OH →加0.8g焦性沒(méi)食子酸 → 83℃水浴30分鐘（皂化脂肪）→ 冷卻后移入250ml分液漏斗中 → 加60ml水 → 用40ml乙醚抽提三次 →合并乙醚抽提液 → 用水洗至中性 →用索氏法除乙醚 → 除去后用5ml石油醚溶解瓶中內(nèi)容物 → 然后移入刻度試管中
2）層析
在層析柱內(nèi)裝8cm高度中性氧化鋁 → 2cm高度堿性氧化鋁及1cm無(wú)水硫酸鈉→ 以石油醚浸透 → 裝皂化后的樣液慢慢于柱內(nèi)→ 用1～2ml石油醚洗試管 → 洗液倒入柱內(nèi)，活塞打開(kāi)以每分鐘為35滴左右的速度打開(kāi)，當(dāng)液面降到接近硫酸鈉時(shí) → 加5ml石油醚→ 隨后用5ml洗脫液逐次洗滌。
層析柱上第一個(gè)黃色層析層，一般是β-胡蘿卜素，此帶在12%洗脫液前后洗去，收集于10ml容量瓶中直到流出物不呈黃色為止，此層可測(cè)β-胡蘿卜素用，而VA一般在50%洗脫液洗出，用2ml刻度吸管收集1ml。吸約0.2ml于小試管中→加0.3ml25%三氯化銻→溶液如呈蘭色→表明有VA存在，故0.5ml用石油醚定容10ml。
3）樣液測(cè)定
以石油醚為空白
4）計(jì)算
VA(I.μ100G)=(E×106×2)/(1830×100×W)×(1000/0.3)
0.3 ：每0.3μg VA相當(dāng)于1 I.μE：消光值，W：樣品重量（g），1830：石油醚中其消光值1%cm為1830，（I.μ）： 一個(gè)國(guó)際單位，維生素A相當(dāng)于0.6 μgβ-胡蘿卜素。
